Веремчук О.А., Моисеев Д.В.
Валидация методики количественного определения флавоноидов в побегах вереска обыкновенного
УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», Республика Беларусь
Резюме.
Целью данного исследования было разработать и валидировать методику количественного определения флавоноидов в побегах вереска обыкновенного в пересчете на изокверцитрин при помощи жидкостной хроматографии. Хроматографическое разделение проводили на колонке Zorbax SB С8 (4,6г250 мм, 5 мкм) с подвижной фазой, состоящей из фосфатного буферного раствора рН=3,0 и ацетонитрила (80:20, об./об.).
Валидацию разработанной методики количественного определения флавоноидов в побегах вереска обыкновенного проводили по следующим параметрам: специфичность, линейность, правильность, точность, робастность. Зависимость аналитического сигнала (площадь пика изокверцитрина) от концентрации изокверцитрина была линейной в диапазоне концентраций от 50 до 2000 мкг/мл, а коэффициент корреляции был равен 0,9995. Правильность методики устанавливали методом стандартных добавок. Процент открываемости составил 102,1±1,3%. Методика является точной, так как величины относительных стандартных отклонений не превышали 5,0%. Робастность методики подтверждали путем изменения времени экстракции (60±5 мин.), соотношения растворителей (±1%) и скорости подачи подвижной фазы (1,0±0,1 мл/мин.). Исследуемые параметры значимо не влияли на результаты эксперимента, поэтому методику можно считать робастной. Содержание флавоноидов в пересчете на изокверцитрин и сухое сырье в побегах вереска обыкновенного составило 36,8±1,3 мг/г.
Разработанная и валидированная методика количественного определения флавоноидов в побегах вереска обыкновенного методом жидкостной хроматографии является линейной, специфичной, правильной, точной и робастной в пределах диапазона применения и может использоваться при рутинном контроле качества исследуемого сырья.
Ключевые слова: флавоноиды, изокверцитрин, жидкостная хроматография, вереск обыкновенный.
Литература
1. ТКП 451-2012 (02041), BY. Производство лекарственных средств. Спецификации: методы испытаний и критерии приемлемости для лекарственного растительного сырья, продуктов из лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения. – Введ. 29.11.12. – Минск : Департамент фармацевтической промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь, 2012. – 17 с.
2. Phytochemistry of Heather (Calluna vulgaris (L.) Hull.) and its altitudinal alteration / M. Monschein [et al.] // Phytochem Rev. – 2010. – Vol. 9. – P. 205-215.
3. Jalal, M. A. F. Phenolic composition and its seasonal variation in Calluna vulgaris / M. A. F. Jalal, D. J. Read, E. Halsamt // Phytochemistry. – 1982. – Vol. 21, N 6. – P. 1397-1401.
4. Bioassay-guided isolation of kaempferol-3-O-B-d-galactoside with anti-inflammatory and antinociceptive activity from the aerial part of Calluna vulgaris L. / I. Orhan [et al.] // Journal of Ethnopharmacology – 2007 Oct. – Vol. 114, N 1. – P. 32-37.
5. Anti-inflammatory, antioxidant and anticancer activity of Quercetin and its analogues / U. J. Joshi [et al.] // International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences. – 2011. – Vol. 2, N 4. – P. 1756-1766.
6. Флавоноиды: биохимия, биофизика, медицина / Ю. С. Тараховcкий [и др.]. – Пущино: Sуnchrobook, 2013. – 310 c.
7. Diuretic and potassium-sparing effect of isoquercitrin-an active flavonoids of Tropaeolum majus L. / A. J. Gasparotto [et al.] // J. of Ethnopharmacol. – 2011 Mar. – Vol. 134, N 2. – P. 210-215.
8. Jäger, A. K. Flavonoids and CNS / A. K. Jäger, L. Saaby // Molecules. – 2011 Feb. – Vol. 16, N 2. – P. 1471-1485.
9. Molecular mechanisms of the neuroprotective/neurorescue action of multi-target green tea polyphenols / S. A. Mandel [et al.] // Front. Biosci. (Schol. Ed). – 2012 Jan. – Vol. 4. – P. 581-598.
10. Saaby, L. MAO-A inhibitory activity of quercetin from Calluna vulgaris (L.) Hull. / L. Saaby, H. B. Rasmussen, A. K. Jäger // Journal of Ethnopharmacology. – 2009. – Vol. 121, N 1. – P. 178-181.
11. Орлова, О. А. Подбор оптимальных условий экстракции из вереска обыкновенного / О. А. Орлова // Актуальные вопросы современной медицины и фармации : материалы 65-й итоговой науч.-практ. конф. студентов и молодых ученых, 24-25 апр. 2013 года. – Витебск, 2013. – С. 398-399.
12. Государственная фармакопея Республики Беларусь. В 3 т. Т. 1. Общие методы контроля качества лекарственных средств / под общ. ред. Г. В. Годовальникова. – Минск : Минский государственный ПТК полиграфии, 2006. – 656 с.
Сведения об авторах:
Веремчук О.А. аспирант кафедры стандартизации лекарственных средств с курсом ФПК и ПК УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет»;
Моисеев Д.В. – к.ф.н., доцент, заведующий кафедрой стандартизации лекарственных средств с курсом ФПК и ПК УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет».
Адрес для корреспонденции: Республика Беларусь, 210023, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра стандартизации лекарственных средств с курсом ФПК и ПК. E-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. – Веремчук Оксана Александровна.
