DOI: https://doi.org/10.22263/2312-4156.2020.3.23
Пашинская Е.С., Семенов В.М., Побяржин В.В., Кубраков К.М.
Методика воспроизведения экспериментальной метастазирующей крысиной глиомы С6 с использованием флюоресцентного красителя
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет, г. Витебск, Республика Беларусь
Вестник ВГМУ. – 2020. – Том 19, №3. – С. 23-29.
Резюме.
Цель – разработать методику воспроизведения экспериментальной метастазирующей крысиной глиомы С6 с использованием флюоресцентного красителя.
Опыт проводили на 10 самках крыс линии Wistar. Реализация цели достигалась за счет того, что культуру опухолевых клеток С6 суспензировали в питательной среде, затем к полученной суспензии добавляли флюоресцентный краситель CellBrite™ Orange Cytoplasmic Membrane Dye и помещали в инкубатор. После инкубирования суспензии опухолевых клеток С6 с флюоресцентным красителем CellBrite™ Orange Cytoplasmic Membrane Dye, ее доставали и отмывали три раза. Образовавшуюся суспензию окрашенных живых опухолевых клеток в концентрации 10х109 вводили подкожно в надключичную область. Затем животному ставили внутримышечную инъекцию метпрезона в течение 10 дней. Через 3 месяца на месте введения культуры окрашенных опухолевых клеток С6 фиксировали новообразование. Новообразование и внутренние органы крысы забирали для проведения оценки миграции окрашенных опухолевых клеток С6 с целью подтверждения процесса метастазирования с помощью конфокального микроскопа. Из биоптатов опухоли и органов готовили препараты для иммуногистохимического подтверждения глиомной специфичности путем определения маркеров GFAP, S-100.
Ключевые слова: глиома, метастазирование, флюоресцентный краситель, крыса.
Литература
1. Mapping the hallmarks of lung adenocarcinoma with massively parallel sequencing / M. Imielinski [et al.] // Cell. – 2012 Sep. – Vol. 150, N 6. – Р. 1107–1120.
2. Intracerebral metastasis of glioblastoma multiforme. Case report and literature review / D. Jezewski [et al.] // Ann. Acad. Med. Stetin. – 2011. Vol. 57, N 1. Р. 59 63.
3. Clinical and molecular characteristics of NF1-mutant lung cancer / A. J. Redig [et al.] / Clin. Cancer Res. – 2016 Jul. Vol. 22, N 13. – Р. 3148–3156.
4. Global cancer statistics / A. Jemal [et al.] // CA. Cancer J. Clin. – 2011 Mar-Apr. – Vol. 61, N 2. Р. 69–90.
5. Juvenile myelomonocytic leukemia displays mutations in components of the RAS pathway and the PRC2 network / A. Caye [et al.] // Nat. Genet. – 2015 Nov. Vol. 47, N 11. Р. 1334–1340.
6. Jankowska, M. Sexual functioning in young women in the context of breast cancer treatment / M. Jankowska // Rep. Pract. Oncol. Radiother. – 2013 May. Vol. 18, N 4. Р. 193–200.
7. Морфологические и физиологические особенности раковых клеток у млекопитающих / В. В. Побяржин [и др.] // Вестн. ВГМУ. – 2016. – Т. 15, № 6. – С. 28–40.
8. Генные механизмы возникновения раковых опухолей / В. М. Семенов [и др.] // Здравоохранение. 2017. № 7. С. 38 47.
9. Колотов, К. А. Иммуногистохимические особенности глиальных опухолей головного мозга / К. А. Колотов, О. В. Машковцев, Б. Н. Бейн // Мед. альм. – 2012. № 4. – С. 66 69.
10. Корниенко, В. Н. Опухоли головного мозга / В. Н. Корниенко // Вестн. РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. 2004. Т. 15, № 1/2. С. 23 30.
11. Albesiano, E. Mechanisms of local immunoresistance in glioma / E. Albesiano, J. E. Han, M. Lim // Neurosurg. Clin. N. Am. – 2010 Jan. Vol. 21, N 1. P. 17 29.
12. Altaner, C. Glioblastoma and stem cells / C. Altaner // Neoplasma. 2008. Vol. 55, N 5. P. 369 374.
13. Халанский, А. С. Перевиваемый штамм глиомы крысы 101.8. I. Биологическая характеристика / А. С. Халанский, Л. И. Кондакова // Клин. и эксперим. морфология. – 2013. – № 4. С. 63–68.
14. Халанский, А. С. Перевиваемый штамм глиомы крысы 101.8. II. Использование в качестве модели для экспериментальной терапии опухолей мозга / А. С. Халанский, Л. И. Кондакова, С. Э. Гельперина // Клин. и эксперим. морфология. – 2014. № 1. С. 50–59.
15. Barth, R. F. Rat brain tumor models in experimental neuro-oncology: the C6, 9L, T9, RG2, F98, BT4C, RT-2 and CNS-1 gliomas / R. F. Barth, B. Kaur // J. Neurooncol. – 2009 Sep. – Vol. 94, N 3. – P. 299–312.
16. Способ соно-фотодинамической терапии перевитой подкожно глиомы С6 у крысы : пат. 19417 Респ. Беларусь МПК A61N 5/067, A61N 7/00 / Истомин Ю. П., Александрова Е. Н., Чалов В. Н., Церковский Д. А. ; заявитель и патентообладатель Респ. науч.-практ. центр онкологии и мед. радиологии им. Н. Н. Александрова. – № a20120970 ; заявл. 27.06.12 ; опубл. 28.02.14, Афіц. бюл. № 4.
17. Черкасова, Е. И. Работа с культурами клеток : учеб.-метод. пособие / Е. И. Черкасова, А. А. Брилкина. – Нижний Новгород : Изд-во Нижегород. ун-та, 2015. – 57 с.
18. Иммуногистохимические методы исследования новообразований различного генеза : инструкция по применению № 160-1110 : утв. М-вом здравоохранения Респ. Беларусь 11.02.2011 г. / Э. А. Надыров [и др.]. – Гомель, 2011. – 20 c.
19. Сайфитдинова, А. Ф. Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов : учеб.-метод. пособие / А. Ф. Сайфитдинова. – Санкт-Петербург : Соло, 2008. – 68 с.
20. Экспериментальные модели мультиформной глиобластомы человека / Т. И. Хомякова [и др.] // Клин. и эксперим. морфология. – 2015. – № 1. – С. 60 69.
21. Метастазы глиобластом: ретроспективный анализ серии из шести клинических наблюдений / С. А. Горяйнов [и др.] // Вопр. нейрохирургии им. Н. Н. Бурденко. – 2015. – Т. 79, № 2. – С. 33–43.
Сведения об авторах:
Пашинская Е.С. – к.б.н., доцент, докторант кафедры инфекционных болезней с курсом ФПК и ПК, Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет;
Семенов В.М. – д.м.н., профессор, заведующий кафедрой инфекционных болезней с курсом ФПК и ПК, Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет;
Побяржин В.В. – к.б.н., доцент, декан факультета подготовки иностранных граждан, Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет;
Кубраков К.М. – к.м.н., доцент кафедры неврологии и нейрохирургии, докторант кафедры инфекционных болезней с курсом ФПК и ПК, Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет.
Адрес для корреспонденции: Республика Беларусь, 210009, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет, кафедра инфекционных болезней с курсом ФПК и ПК. E-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра. – Пашинская Екатерина Сергеевна.
